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Protein L Magnetic Beads蛋白L磁珠

簡要描述:

Protein L Magnetic Beads蛋白L磁珠公司正在出售的產(chǎn)品:人結(jié)直腸腺癌細胞 成纖維細胞生長因子受體4封閉多肽 禽傳染性支氣管炎病毒型PCR檢測試劑盒 大鼠抗髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAG Ab)ELISA檢測試劑盒 氨基(AA)含量活性比色法檢測試劑盒 穗狀平臍蠕孢 微管動力調(diào)節(jié)蛋白FAM82A抗體

更新時間:2024-01-12

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Protein L Magnetic Beads蛋白L磁珠

商品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

Protein L Magnetic Beads蛋白L磁珠

1ml50mg/ml

A-Hc2058

Protein L Magnetic Beads是大小均勻的,表面共價綴合超純的重組蛋白 L(純度> 95%)的二氧化硅基質(zhì)的超順磁珠。與蛋白 A 或蛋白G 磁珠相比,蛋白 L 磁珠可更廣泛的與小鼠、人和大鼠的 Ig 的類和亞類結(jié)合,使抗體純化更靈活。當需要使用的一級抗體選定時, 此磁珠在免疫沉淀和細胞分選中特別適用。該磁珠還可用于從幾種物種的血清樣本、腹水液、血漿或組織培養(yǎng)上清液中快速高效地一步純化抗體。表 1 總結(jié)了蛋白 L 對不同抗體的結(jié)合特異性。


產(chǎn)品特點: 


·適用于快捷,簡便的一步高通量程序,無需純化柱或過濾器,或者重復的移液或離心(Fig.1)


·由于磁珠的親水性表面,非特異性結(jié)合率極低


·結(jié)合容量


·對樣本體積要求低,便于自動化操作


·性價比高


產(chǎn)品屬性:


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緩沖液成分:

·Protein L Beads (懸浮在 10 mM Tris, 0.15 M NaCl, 0.1% BSA,1 mM EDTA, pH7.4, 0.1% NaN3 緩沖液中)

·1x Binding/Washing Buffer (0.1 M 磷酸鈉,0.15 M 氯化鈉, pH 7.2)

·1x Elution Buffer (0.2 M Glycine/HCl,pH 2.5)

·1x Neutralization Buffer (1.0 M Tris-HCl, pH 9.0)

·Storage buffer (10 mM Tris, 0.15 M NaCl, 0.1% BSA,1 mM EDTA, pH 7.4, 0.1% NaN3)

所需耗材:

磁力分離器(適用于手動操作):根據(jù)實驗時生物


QQ截圖20240110094643.jpg


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PCR基本步驟及注意事項?

一、實驗原理

PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內(nèi)DNA的復制。在生物體內(nèi)DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設(shè)計的特定序列,實現(xiàn)對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個反應的緩沖環(huán)境;反應過程同生物體內(nèi)一樣,DNA雙鏈打開,引物結(jié)合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內(nèi)靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應溫度實現(xiàn)的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結(jié)合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復重復此過程即可實現(xiàn)對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環(huán)開始才產(chǎn)生出和靶DNA區(qū)段相同的DNA分子,進一步循環(huán)地產(chǎn)生出靶DNA區(qū)段的指數(shù)加倍。

在擴增后期,由于產(chǎn)物積累,使原來呈指數(shù)擴增的反應變成平坦的曲線,產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)而明顯上升,這稱為平臺效應。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產(chǎn)生的低濃度非特異性產(chǎn)物繼續(xù)大量擴增,達到較高水平。因此,應適當調(diào)節(jié)循環(huán)次數(shù),在平臺期前結(jié)束反應, 減少非特異性產(chǎn)物。到達平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

二、主要的成分

1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產(chǎn)物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預變性時間10min足夠,質(zhì)粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min、PCR產(chǎn)物預變性2min即可。

注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環(huán)時只有一個引物結(jié)合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個引物均與特異位點結(jié)合,從而實現(xiàn)了與常規(guī)PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增,原因就在于實現(xiàn)PCR反應的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質(zhì)量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結(jié)構(gòu)比較復雜,提取的濃度也往往比較大,為防止?jié)舛冗^大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物由于其結(jié)構(gòu)簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

PCR實驗中應該注意的問題有哪些?

沒有ct值

檢測結(jié)果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問題:

1、循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準);

2、PCR程序設(shè)置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結(jié)束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

3、引物或探針降解??赏ㄟ^PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據(jù)試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應考慮樣本準備中雜質(zhì)的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內(nèi)含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)。

ct值過晚

在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數(shù)的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環(huán), 否則定量不準確。

因此,判斷Ct值出現(xiàn)過晚是否屬于非正常情況, 需要根據(jù)具體實驗設(shè)計和目的進行。

1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優(yōu)化;引物或探針設(shè)計不合理, 需要重新設(shè)計;

2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應, 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;

4、PCR產(chǎn)物太長。PCR產(chǎn)物設(shè)計超過500bp;

5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或?qū)⒛0暹M行稀釋。

公司正在出售的產(chǎn)品:

艾利希體屬(埃立克體屬)通用染料法熒光定量PCR試劑盒

登革熱抗體ELISA試劑盒 DF-Ab免費代測試劑

河流弧菌染料法熒光定量PCR試劑盒

草果染料法PCR鑒定試劑盒

補體片段3cELISA試劑盒 C3c免費代測試劑

人副流感病毒1PCR檢測試劑盒說明書

乙型肝炎病毒PCR檢測試劑盒

CopineⅢ蛋白ELISA試劑盒

滅鮭氣單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒

扎伊爾埃博拉病毒PCR檢測試劑盒

布魯氏菌抗體IgGELISA試劑盒

棉花源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒

魯氏不動桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

促甲狀腺受體抗體ELISA試劑盒

牛型放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒

球孢白僵菌探針法熒光定量PCR試劑盒

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犬巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

蛋白二硫鍵異構(gòu)ELISA試劑盒

牛皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒

流行性腦膜炎雙球菌PCR檢測試劑盒

蛋白3特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體ELISA試劑盒

綠膿桿菌PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

流感病毒H11亞型PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

電子轉(zhuǎn)運黃蛋白-泛醌氧化還原/電子轉(zhuǎn)運黃蛋白脫氫ELISA試劑盒

木賊鐮刀菌PCR檢測試劑盒供應

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒PCR檢測試劑盒

多聚血清蛋白ELISA試劑盒

棉花黃萎病菌PCR試劑盒

空腸彎曲桿菌PCR檢測試劑盒直銷

人谷肽S轉(zhuǎn)移TT(GSTπ)ELISA試劑盒

牛皰疹病毒2PCR檢測試劑盒直銷

侵肺巴斯德菌探針法熒光定量PCR試劑盒

人血管生成樣蛋白3(ANGPTL3)ELISA檢測試劑盒

山楂探針法PCR鑒定試劑盒

節(jié)瘤擬桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒

人防御 試劑盒ELISA

皮里陶病毒PCR檢測試劑盒

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Q熱科克斯體1(Q fever)抗體(IgA)試劑盒ELISA

Protein L Magnetic Beads蛋白L磁珠鸚鵡喙羽病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

玉米GA/MS PCR檢測試劑盒

人半乳糖6硫酯(Gal-6S) ELISA試劑盒

牛皮蠅蛆探針法熒光定量PCR試劑盒